继“纯化侠”之后，小胡巴可不高兴了：“同是暑期热映，为什么忽视我的存在，就因为我长得像萝卜吗？”萝卜可是好东西，可食用、可入药。那么问题来了，如何纯化得到具有药理活性的物质呢？本期纯话题，把最有用的教给您（结尾处有彩蛋！）
年4月，江苏某药业公司的一批生脉注射液热原不合格，被责令停产整改。
年5月，不合格银杏叶提取物违法使用，上百家中药企业不断曝光，中国药检所专门公开发布《银杏叶药品补充检验方法的公告》：使用层析方法检测槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量。
年6月，江苏省食药监局通报7个批次的复方丹参片中有效成分含量测定不合格。
什么是天然产物？为什么天然产物分离提取的难度这么大？为什么广泛使用的中药产品质量问题屡见报端？
天然产物活性成分
天然产物或天然药物，是从动植物、矿物和微生物中分离得到的任何具有药理活性的物质。有时特指传统中草药(TCM,TraditionalChineseMedicine)。
天然产物的化学成分极其复杂，有效成分种类很多，包括生物碱、甙、黄酮、醌、多酚、内脂、香豆素、萜、有机酸、寡糖、多糖、环肽、甚至蛋白。
天然产物的分离提取难度极大，纯化工艺往往涉及多种分离技术以及各种技术之间的合理连接和配合。
说了这么多，到底哪些层析手段才能够越过重重障碍，获取真金呢？
最适合于天然产物纯化的层析填料
SephadexLH-20是一种羟丙基化的葡聚糖凝胶。
可以耐受各种有机溶剂
具有分子筛的特性
可按分子量大小分离物质
具有反相分配层析的效果
适合于分离有机物
SephadexLH-20在天然产物分离中应用广泛，对上述天然产物的化学成分都具有非常显著的分离效果。下图利用SephadexLH-20纯化迷迭香酸。
离子交换层析：生物碱和有机酸纯化的上上策
生物碱是来源于植物的含氮类有机化合物，是麻黄、黄连、洋金花、苦参、汉防己、马钱子、乌头等重点中药的有效成分。
有机酸在中草药的叶、根、特别是果实中广泛分布。常见的有酒石酸、草酸、苹果酸、抗坏血酸（即维生素C）、水杨酸等。
利用生物碱的正电荷特性和有机酸的负电荷特性，可以选择相应的阳离子层析填料（如CaptoS或SPFF）和阴离子层析填料（如CaptoQ或QFF）对其进行有效分离。下图是利用SPSepharoseHP阳离子交换层析填料分离士的宁、咖啡因、阿托品、普鲁卡因及奎宁等5种生物碱。
反相层析：分离天然产物常用的层析技术
天然产物的活性成分大都有一定的极性和非极性，因此反相层析是常用的一种提取单体化合物的有效方法。
SOURCE系列反相层析填料：
可耐受强酸强碱，兼容pH1-12
只要能有效结合SephadexLH-20，原理上可以将所有的活性成分单体分离出来。
下图是SOURCE15RPC反相层析填料分离河豚鱼毒素。
凝胶过滤层析：天然产物分离纯化必备
天然产物中的活性成分种类多样，分子大小和结构千差万别，凝胶过滤层析依靠分子大小和形状的差别进行分离，对多糖，有机酸，多酚，黄芩甙等分离效果极佳。
传统方法是使用SephadexG系列凝胶过滤填料，下面为大家介绍两款性能更佳的填料：
Superdex凝胶过滤填料
分离范围10K-K
选择性与Sephadex相同
流速、分辨率、化学稳定性大大增加
能分离出多数倍的多糖组分
时间由以往的一天缩短到一小时。
Superose12凝胶过滤填料
分离范围1K-K
耐压性能更好
分辨率更高
流速更快
如下图，Superose12可以对6种二羟基苯甲酸实现良好分离。
天然产物活性成分的分离纯化方案
由于天然产物的活性成分极其复杂，结构和性质相近，并且可能不同物质表现为相似的活性或者相同物质的活性不同，因此采用单步层析经常不能满足获得活性单体的需求。在实验当中，往往需要设计到多步层析的衔接和分离纯化工艺的合理优化。
彩蛋来了：天然产物活性成分纯化秘笈
接下来就是哥家具体针对天然产物中不同活性物质所设计出的分离提取纯化方案，分享仅此一次，千万不要错过哦~
生物碱：阳离子交换+中高压反相(SPHP+SOURCERPC)，如粉防己碱，虫草素等
有机酸：阴离子交换+SephadexLH20(QHP+SephadexLH-20)，如三七素，迷迭香酸等
黄酮/黄酮甙：阴离子交换(QHP)+硅胶或SephadexLH-20，如红花素，葛根素等
皂甙：阴离子交换（QHP）+反相硅胶，如柴胡皂甙等
多酚：硅胶正相+SephadexLH-20，如茶多酚等
动物小分子毒素：阳离子交换（SPHP）+中压反相，如河豚鱼毒素等
萜类：硅胶正相中高压，如紫杉醇等
多糖：凝胶过滤（SephadexG10,15）或阴离子交换DEAEFF，如香菇多糖和黄芪多糖
脱色/除热源：SephadexLH-20或阴离子交换层析填料（CaptoQ或QFF），如中药注射液脱色等
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