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基于人外周血单核细胞P-糖蛋白研究汉防己甲素和青藤碱的激素增敏作用

许文成1,金善善1,2,3,王小琴1,21.医院2.湖北省中医药研究院肾病研究所3.湖北中医药大学

目的免疫性肾小球疾病临床上以糖皮质激素治疗为主，但患者对激素的反应不同，主要分为激素敏感型、激素耐药型。激素耐药型患者可应用的免疫抑制剂十分有限。长期临床实践发现，中药对激素有一定的协同增敏作用。已研究表明肾病综合征激素耐药型患者MDR-1基因和P-糖蛋白表达增高是形成激素抵抗的原因之一；另有研究表明防己和青风藤有效成分汉防己甲素（TET）和青藤碱（SN）可抑制肿瘤耐药细胞株细胞膜表面P-糖蛋白外排药物的功能、逆转肿瘤细胞株的耐药性。因此，结合临床经验，本研究拟以P-糖蛋白为靶点探索TET和SN对激素的增敏作用。

方法健康志愿者外周血单核细胞培养模型用于获得药物的免疫抑制药效，结果以半数抑制率IC50值表示；罗丹明染色法联合流式细胞术测定药物对人外周血免疫细胞膜表面P-糖蛋白功能的影响。

结果（一）nM级别的TET能显著降低甲基泼尼松龙（MP）的IC50值：7名健康志愿者的MP的IC50值为4.11（0.47~5.08）ng/mL，在有低剂量TET（0.3、3、30、nmol/L）环境下7名健康志愿者的MP的IC50值分别为0.54（0.32~3.13）、0.47（0.19~1.24）、0.87（0.50~2.40）和0.08（0.01~2.79）ng/mL。nM级的TET本身对刀豆蛋白A刺激的人外周血单核细胞几乎无影响。（二）nM级别TET可以显著抑制人外周血CD4+、CD8+及总淋巴细胞膜表面的P-糖蛋白功能，该抑制作用与阳性对照药维拉帕米5μM的作用强度相当，几乎能抑制全部细胞膜表面的P-糖蛋白功能，且该抑制作用不受MP的影响。（三）μM级别的SN也能显著降低甲基泼尼松龙的IC50值，与TET不同之处在于μM级的SN本身对刀豆蛋白A刺激的人外周血单核细胞有显著抑制作用。6名健康志愿者的MP的IC50值为3.18（0.45~6.81）ng/mL；在SN（0.03、0.3、3、30μM）存在的情况下，6名健康志愿者的MP的IC50值分别为1.85（0.05~5.15）、0.83（0.10~3.90）、0.56（0.09~1.62）和0.59（0.05~1.30）ng/mL。（四）μM级别的SN对人外周血淋巴细胞CD4+、CD8+及总淋巴细胞膜表面的P-糖蛋白功能无抑制作用。结论（一）TET和SN都能增加激素的免疫抑制药效，TET的增敏作用强于SN；（二）TET的激素增敏作用与其对CD4+、CD8+及总淋巴细胞膜表面的P-糖蛋白抑制作用有关；（三）SN的激素增敏作用与其对CD4+、CD8+及总淋巴细胞膜表面的P-糖蛋白抑制作用无关。